第八百八十五章 乌骨藤作用
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让人意外的事情是，这个人的声音不是来自已经有点着急的杨光，也不是来自本来就起脾气不好的刘教授。
而是来自于陈浩然。
陈浩然说出这样的话，让在场众人，瞬间感觉到不可思议。
简直让人不敢相信。
为什么他会说出这样的话？
“陈家主他怎么了？”
“这件事情太重要了吧，重要到连陈家主都淡定不了，简直是……让人真的不可能很淡定啊！”
在场的十三世家的人交头接耳，纷纷说道。
显然，钟医也没有预料到这个状况，他深深的看了一眼陈浩然，语气坚定地说道。
“重点！重点就是乌骨藤！
乌骨藤——是萝蓐科植物通关藤的藤、根或叶，具有止咳平喘、散结止痛、清热解毒功效，民间主要用于消炎、祛肿等。
通过我的研究表明，其含有甾体、三萜、挥发油、多糖等化学成分，具有抗癌、平喘、降压、抑菌、免疫调节、保肝利尿等作用。
其提取物的纯化中药制剂已经商品化，主要用于消炎、平喘、抗癌，但其活性成分及药理作用机制仍有待进一步深入研究。
云南药厂的张秋厂长一定知道，在那里的红河州金平、元阳、个旧、蒙自等地均有乌骨藤分布，为充分开发利用该资源，本实验对其化学成分进行研究。
当然，这一次，我们也是经过了严格的药材、仪器和试剂的测试的。
我们所采用的药材乌骨藤，都是采自云南省个旧市贾沙乡水塘村，鉴定为萝蓐科植物通关藤的藤、根或叶。
仪器我采用的是Bruker．ARX．500核磁共振仪。
HERA uhiskarum酶标仪。
薄层色谱硅胶GF254、柱色谱硅胶。SephadexLH-20凝胶。AB-8吸附树脂。
8 ODS—A硅胶。甲醇为色谱纯。其他试剂均为分析纯。
而所用的试剂是来自上海碧云天生物技术有限公司的CCK-8。美国Sigma公司的DMSO。胎牛血清、RPMI1640、P／S、Try。96孔细胞培养板。
还有人胃癌细胞MNK-45、SGC-7901。5-氟尿嘧啶注射液。
实验方法是，首先提取与分离取干燥乌骨藤5千克，粉碎，百分之80乙醇回流提取3次(分别是4、3、3 小时)。
然后，合并提取液，减压浓缩，得浸膏213克，加水溶解，石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，减压回收溶剂。
得到石油醚部位15克、氯仿部位15克、乙酸乙酯部位27克、正丁醇部位42克
。氯仿部位以氯仿一甲醇梯度洗脱，得到药物标志物1—3，经反复硅胶柱层析，分别得到化合物9(10毫克)、1(14毫克)、6(24毫克)。
乙酸乙酯部位以石油醚-丙酮梯度洗脱，得到流份实验标志物1～4，其中实验标志物1步硅胶柱层析，得到化合物1(65毫克)。
实验标志物3经反复硅胶柱层析和Sephadex LH-20凝胶柱纯化，得到化合物7(35毫克)和8(26毫克)。
正丁醇部位以氯仿一甲醇梯度洗脱，得到流份实验标志物1～4，其中实验标志物1经反复硅胶柱层析，得到化合物5(51毫克)。
实验标志物4上ODS柱，甲醇一水梯度洗脱，再经Sephadex LH-20凝胶柱纯化，得到化合物2(42毫克)、3(57毫克)、4(73毫克)。
既然我觉得它有用，那么我们采用抗肿瘤活性实验法进行实验。
首先，细胞接种用含百分之10胎牛血清的RPMI1640培养液培养MNK-45和SGC一7901，收集对数生长期细胞，消化后调整其悬液浓度，以每孔1×104个细胞接种于96孑L板，每孔200 trL。
细胞培养将细胞板放人CO：孵箱中，在37摄氏度、百分之5CO，条件下培养24 小时，当细胞达到80％～90％汇合度时，弃去培养基。
接下来，就是细胞给药。
我们将将样品用DMSO溶解后，按200、100、50、25、12．5克／毫升质量浓度加人细胞孔内，重复3批，并另加3孔作为阳性对照(5-氟尿嘧啶)组。
3孔作为DMSO对照组，每孔总体积100止，在酶联免疫检测仪上测定各孑L吸光度，计算细胞抑制率、
公式为抑制率=(1一加药细胞吸光度／对照细胞吸光度)×100％。再采用Logit法计算IC。
然后是实验结果。
结构鉴定分别有化合物1：白色无定形粉末(甲醇)。
化合物2：白色粉末(氯仿)，化合物3:针状结晶(甲醇)。化合物4：黄色粉末(甲醇)。化合物5：黄色针晶(甲醇)化合物6：黄色粉末(甲醇)，化合物7：无色针状结晶(氯仿)，化合物8：白色粉末(甲醇)。
我们这里能够看出，LC与谷甾醇对照品Rf值及颜色一致，混合熔点不下降，故鉴定该化合物为p一谷甾醇。
TLC与胡萝卜苷对照品Rf值及颜色一致，混合熔点不下降，故鉴定该化合物为胡萝卜苷。
还有就是抗肿瘤活性。
根据实验效果显示，山柰酚对MKN-45和SGC-7901的抑制作用较强，IC50分别为48．87。
这个结果，远远高于阳性对照(5-氟尿嘧啶)。
而山柰酚4—甲醚、乌骨藤苷H、I活性较强。
所以，我们能够清楚的得到了结果。
目前，关于乌骨藤提取物抗胃癌活性的报道主要集中在水提物和甾体化合。
而这一次的实验采用人胃癌细胞SGKN45，对该植物中分得的化合物进行体外抗肿瘤活性实验，发现黄酮类成分山柰酚对两者均表现出明显的抑制作用。
我这一次的实验表明，其能够通过作用于SGC7901的活性氧代谢途径来诱发细胞溶血，从而产生抗增殖活性。
当然，这一次尚无对MKN45作用机制进行研究，故需要更深入的探索，以期为开发利用乌骨藤提供科学依据。
这项研究，单凭我一个人肯定是难以完成的，所以，我想要……”
还没有等钟医说完，甚至钟医都没有没有表达出什么想法的时候，一个声音急迫的表示了自己的意愿。
“我可以！我真的可以！钟医，我可以帮你，不，我可以给你打下手，进行这些实验标志物的进一步开发。”
杨光毫不犹豫地表达道。
让人意外的事情是，这个人的声音不是来自已经有点着急的杨光，也不是来自本来就起脾气不好的刘教授。
而是来自于陈浩然。
陈浩然说出这样的话，让在场众人，瞬间感觉到不可思议。
简直让人不敢相信。
为什么他会说出这样的话？
“陈家主他怎么了？”
“这件事情太重要了吧，重要到连陈家主都淡定不了，简直是……让人真的不可能很淡定啊！”
在场的十三世家的人交头接耳，纷纷说道。
显然，钟医也没有预料到这个状况，他深深的看了一眼陈浩然，语气坚定地说道。
“重点！重点就是乌骨藤！
乌骨藤——是萝蓐科植物通关藤的藤、根或叶，具有止咳平喘、散结止痛、清热解毒功效，民间主要用于消炎、祛肿等。
通过我的研究表明，其含有甾体、三萜、挥发油、多糖等化学成分，具有抗癌、平喘、降压、抑菌、免疫调节、保肝利尿等作用。
其提取物的纯化中药制剂已经商品化，主要用于消炎、平喘、抗癌，但其活性成分及药理作用机制仍有待进一步深入研究。
云南药厂的张秋厂长一定知道，在那里的红河州金平、元阳、个旧、蒙自等地均有乌骨藤分布，为充分开发利用该资源，本实验对其化学成分进行研究。
当然，这一次，我们也是经过了严格的药材、仪器和试剂的测试的。
我们所采用的药材乌骨藤，都是采自云南省个旧市贾沙乡水塘村，鉴定为萝蓐科植物通关藤的藤、根或叶。
仪器我采用的是Bruker．ARX．500核磁共振仪。
HERA uhiskarum酶标仪。
薄层色谱硅胶GF254、柱色谱硅胶。SephadexLH-20凝胶。AB-8吸附树脂。
8 ODS—A硅胶。甲醇为色谱纯。其他试剂均为分析纯。
而所用的试剂是来自上海碧云天生物技术有限公司的CCK-8。美国Sigma公司的DMSO。胎牛血清、RPMI1640、P／S、Try。96孔细胞培养板。
还有人胃癌细胞MNK-45、SGC-7901。5-氟尿嘧啶注射液。
实验方法是，首先提取与分离取干燥乌骨藤5千克，粉碎，百分之80乙醇回流提取3次(分别是4、3、3 小时)。
然后，合并提取液，减压浓缩，得浸膏213克，加水溶解，石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，减压回收溶剂。
得到石油醚部位15克、氯仿部位15克、乙酸乙酯部位27克、正丁醇部位42克
。氯仿部位以氯仿一甲醇梯度洗脱，得到药物标志物1—3，经反复硅胶柱层析，分别得到化合物9(10毫克)、1(14毫克)、6(24毫克)。
乙酸乙酯部位以石油醚-丙酮梯度洗脱，得到流份实验标志物1～4，其中实验标志物1步硅胶柱层析，得到化合物1(65毫克)。
实验标志物3经反复硅胶柱层析和Sephadex LH-20凝胶柱纯化，得到化合物7(35毫克)和8(26毫克)。
正丁醇部位以氯仿一甲醇梯度洗脱，得到流份实验标志物1～4，其中实验标志物1经反复硅胶柱层析，得到化合物5(51毫克)。
实验标志物4上ODS柱，甲醇一水梯度洗脱，再经Sephadex LH-20凝胶柱纯化，得到化合物2(42毫克)、3(57毫克)、4(73毫克)。
既然我觉得它有用，那么我们采用抗肿瘤活性实验法进行实验。
首先，细胞接种用含百分之10胎牛血清的RPMI1640培养液培养MNK-45和SGC一7901，收集对数生长期细胞，消化后调整其悬液浓度，以每孔1×104个细胞接种于96孑L板，每孔200 trL。
细胞培养将细胞板放人CO：孵箱中，在37摄氏度、百分之5CO，条件下培养24 小时，当细胞达到80％～90％汇合度时，弃去培养基。
接下来，就是细胞给药。
我们将将样品用DMSO溶解后，按200、100、50、25、12．5克／毫升质量浓度加人细胞孔内，重复3批，并另加3孔作为阳性对照(5-氟尿嘧啶)组。
3孔作为DMSO对照组，每孔总体积100止，在酶联免疫检测仪上测定各孑L吸光度，计算细胞抑制率、
公式为抑制率=(1一加药细胞吸光度／对照细胞吸光度)×100％。再采用Logit法计算IC。
然后是实验结果。
结构鉴定分别有化合物1：白色无定形粉末(甲醇)。
化合物2：白色粉末(氯仿)，化合物3:针状结晶(甲醇)。化合物4：黄色粉末(甲醇)。化合物5：黄色针晶(甲醇)化合物6：黄色粉末(甲醇)，化合物7：无色针状结晶(氯仿)，化合物8：白色粉末(甲醇)。
我们这里能够看出，LC与谷甾醇对照品Rf值及颜色一致，混合熔点不下降，故鉴定该化合物为p一谷甾醇。
TLC与胡萝卜苷对照品Rf值及颜色一致，混合熔点不下降，故鉴定该化合物为胡萝卜苷。
还有就是抗肿瘤活性。
根据实验效果显示，山柰酚对MKN-45和SGC-7901的抑制作用较强，IC50分别为48．87。
这个结果，远远高于阳性对照(5-氟尿嘧啶)。
而山柰酚4—甲醚、乌骨藤苷H、I活性较强。
所以，我们能够清楚的得到了结果。
目前，关于乌骨藤提取物抗胃癌活性的报道主要集中在水提物和甾体化合。
而这一次的实验采用人胃癌细胞SGKN45，对该植物中分得的化合物进行体外抗肿瘤活性实验，发现黄酮类成分山柰酚对两者均表现出明显的抑制作用。
我这一次的实验表明，其能够通过作用于SGC7901的活性氧代谢途径来诱发细胞溶血，从而产生抗增殖活性。
当然，这一次尚无对MKN45作用机制进行研究，故需要更深入的探索，以期为开发利用乌骨藤提供科学依据。
这项研究，单凭我一个人肯定是难以完成的，所以，我想要……”
还没有等钟医说完，甚至钟医都没有没有表达出什么想法的时候，一个声音急迫的表示了自己的意愿。
“我可以！我真的可以！钟医，我可以帮你，不，我可以给你打下手，进行这些实验标志物的进一步开发。”
杨光毫不犹豫地表达道。